PN0130-1000T Lowry法蛋白浓度测定试剂盒
Lowry 法蛋白浓度测定试剂盒说明书
货号：PN0130
规格：1000T(微孔)
保存：BSA蛋白标准品4℃保存有效期至少3个月，-20℃保存有效期至少一年，其他试剂室温保存有效期至少一年。试剂开封使用后请及时密闭保存，Folin酚乙试剂颜色变成深绿色即失效。
试剂盒组成：
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名称 |
规格 |
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Folin酚甲试剂 A |
100ml×2 |
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Folin酚甲试剂 B |
5ml |
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Folin酚乙试剂 (1N) |
20ml |
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PBS稀释液 |
30ml |
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BSA蛋白标准品 (5mg/ml ) |
1ml |
产品简介：
Folin-酚试剂法包括两步反应：第一步是在碱性条件下，蛋白质与铜作用生成蛋白质-铜络合物；第二步是此络合物将Folin 试剂还原，产生深蓝色，颜色深浅与蛋白质含量成正比。定量范围为5～500μg/ml 蛋白质。Folin 试剂显色反应由酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸引起，因此样品中若含有酚类、柠檬酸和巯基化合物均有干扰作用。此外，不同蛋白质因酪氨酸、色氨酸含量不同而使显色强度稍有不同。
操作步骤：
1.根据需要量，取适量Folin 酚甲试剂A 和B 按50:1 混合，混合后有效期为24 小时，过期失效。
2.根据需要量，取适量BSA 标准品用PBS 稀释稀释10 倍至浓度0.5mg/ml。
若采用酶标仪法(96 孔)
3.将标准品按0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20ul 加到96 孔板中，加PBS 补足到20ul。
4.将样品作适当稀释(最好多做几个梯度)，加20ul 到96 孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点误差比较大，所以尽可能的让样品点落在标准线1/2 后。
5.将配好的Folin 酚甲试剂每孔加入200ul，轻轻震动，混匀，室温放置10 分钟。
6.各孔加入20 微升Folin 酚乙试剂，迅速混匀，37℃放置30 分钟。用酶标仪测定A650 计算蛋白浓度。
若采用分光光度计法（接上述步骤2）
3.取八支（或者更多）5ml 离心管，标号，按下表加入试剂。
4.混匀，37℃放置30 分钟。分光光度计测定A650 计算蛋白浓度。
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离心管号 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7（样品管 1） |
8（样品管 2） |
9（样品管 3） |
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标准蛋白 BSA |
0 |
40ul |
80ul |
120ul |
160ul |
200ul |
200ul适当稀释的样品 1 |
200ul适当稀释的样品2 |
…… |
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PBS |
200ul |
160ul |
120ul |
80ul |
40ul |
0 |
0 |
0 |
0 |
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Folin酚甲试剂 |
2ml |
2ml |
2ml |
2ml |
2ml |
2ml |
2ml |
2ml |
2ml |
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混匀，室温放置 10分钟 |
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Folin酚乙试剂 |
200ul |
200ul |
200ul |
200ul |
200ul |
200ul |
200ul |
200ul |
200ul |
