产品简介:
本体系是用于染料法(SYBR Green I)实时荧光定量的预混体系。产品含有优化浓度的HotStart Taq DNA Polymerase、dNTPs、Mg2+、反应缓冲液和稳定剂等成分。主要用于基因组DNA 靶序列和RNA 反转录后cDNA 靶序列的检测,如基因表达分析,拷贝数分析,SNP 基因型分析等,适用于不同类型荧光定量PCR。
本体系为2×预混实时荧光定量PCR 反应体系,使用时只需加入模板、引物和水,使其工作浓度为1×,即可进行反应。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点,可最大限度地减少人为误差、节约PCR 实验操作时间、降低污染几率。
操作步骤:(标准操作流程)
1. 按照下表配制反应体系
组分
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体积
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DNA模板
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1 μl
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上游引物 (10 μM)
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0.5 μl
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下游引物 (10 μM)
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0.5 μl
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2 x Green qPCR Mixture
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10 μl
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DEPC-ddH2O
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补至 20 μl
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2. 反应设置
两步法流程
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温度
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时间
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预变性
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94℃
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2 min
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变性
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94℃
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15 sec
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退火 -延伸
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60℃
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30 sec
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40-50个循环
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融解曲线
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机器默认设置
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三步法流程 *
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温度
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时间
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预变性
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94℃
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2 min
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变性
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94℃
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15 sec
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退火
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60℃
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15 sec
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延伸
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72℃
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30 sec
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40-50个循环
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融解曲线
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机器默认设置
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*当两步法扩增效率不好的时候建议选择三步法进行qPCR 反应。