产品说明:
在组织细胞的体外培养和原代细胞培养中的组织细胞分散(将组织块制备成单个细胞悬液)以及传代细胞 培养中,贴壁生长细胞的消化分散均要使用组织细胞消化液。常用的消化液为胰蛋白酶,EDTA 等,其功能主要是使细胞间的蛋白质(如细胞外基质)水解,使组织或贴壁细胞分散成单个细胞,制成细胞悬液用于进一步的实验。
金克隆生产的EDTA消化液含0.02%EDTA和等渗透压平衡盐,经过滤除菌,可以直接用于培养细胞的消化。本产品较胶原酶、胰蛋白酶等具有消化温和,不伤害细胞等特点。但其消化能力较弱,贴壁牢固的细胞建议选择胰酶消化液。在使用时通常37℃消化2-5分钟,镜下观察细胞消化情况适当增加消化时间。
使用方法:
贴壁细胞的消化:
① 吸去培养液,用无菌的 PBS、Hanks液(均不含钙、镁)洗涤细胞两次,以去除残余的血清。
② 加入少量EDTA消化液,盖过细胞即可,室温放置 2-5 分钟。不同的细胞消化时间有所不同 。镜下观察细胞消化情况适当增加消化时间。
③ 显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化;或者用移液器吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。此时吸除消化液。加入含血清的细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
④ 如果发现消化不足,可加入EDTA消化液重新消化。
⑤ 如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落,直接用细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000-2000g 离心 1 分钟,沉淀细胞,尽量去除消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
注意事项:
1、由于组织或细胞性质不同,实验人员应依据具体情况,确定最佳消化时间;消化细胞时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁和生长状况;
2、本产品不含抑菌剂,在使用过程中要特别注意无菌操作,避免消化液被微生物污染;
3、不宜4℃长期保存,切忌反复冻融,小量使用时建议分装冻存;
4、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。