土壤酸性蛋白酶(Solid -Acid Protease,S-ACPT)试剂盒(分光光度法)说明书
货号:SH323
规格:50 管/24 样
产品内容:
试剂一:液体60mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入10mL 蒸馏水充分溶解待用;
试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入100uL 试剂七使粉剂润湿,然后加入20mL 试剂一,转入烧杯中沸水浴磁力搅拌溶解后待用;
试剂四:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入50mL 蒸馏水充分溶解待用;
试剂五:液体10mL×1 瓶,4℃保存;
试剂六:液体1.5mL×1 支,0.05mg/mL 标准酪氨酸溶液,4℃保存;
试剂七:液体1.5mL×1 支,4℃保存;
产品说明:
土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化,其水解产物是高等植物的氮源之一。S-ACPT 在酸性环境下催化蛋白质水解,与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。
酸性条件下,S-ACPT 可将酪蛋白水解产生酪氨酸;在碱性条件下,酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝;在680nm 有特征吸收峰。
所需仪器及设备:
可见分光光度计、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿、蒸馏水。
操作步骤:
一、测定操作:
1、分光光度计预热30min 以上,调节波长至680nm,蒸馏水调零。
2、试剂二、三和四40℃水浴10min。
3、样本测定:
试剂名称
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测定管
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对照管
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风干土样(g)
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0.02
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0.02
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试剂一(μL)
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100
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300
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试剂三(μL)
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200
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混匀,40℃水浴30min,振荡5-6 次,使土样与反应液充分接触
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试剂二(μL)
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100
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100
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混匀,10000rpm 室温离心10min,取上清液
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测定管
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对照管
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标准管
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上清液(μL)
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150
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150
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试剂六(μL)
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150
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试剂四(μL)
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700
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700
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700
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试剂五(μL)
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150
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150
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150
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混匀,40℃水浴20min,680nm 下读取各管吸光值A
注意:标准管只需测一次。每个测定管设一个对照管。
S-ACPT 活性计算:
单位定义:每天每g 土样中产生1mg 酪氨酸为一个S-ACPT 活力单位。
S-ACPT(U/g)=C 标准×(A 测定管-A 对照管)÷A 标准管×V 反总÷W÷T=48×(A 测定管-A 对照管)÷A 标准管
C 标准管:标准管浓度,0.05mg/mL;V 反总:反应体系总体积,0.4mL;T:反应时间,30min=1/48d; W:样本质量,0.02g。