产品内容：
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封闭液（正常山羊血清） |
3mL |
6mL |
18mL |
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3% H2O2 |
3mL |
6mL |
18mL |
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Bio-羊抗兔IgG浓缩液 |
30μL |
60μL |
180 μL |
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链酶亲和素-POD浓缩液 |
30μL |
60μL |
180 μL |
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稀释液 |
10mL |
20mL |
60mL |
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20×DAB显色液A |
0.3mL |
0.6mL |
1.8mL |
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20×DAB显色液B |
0.3mL |
0.6mL |
1.8mL |
产品简介：
本试剂盒适合于一抗为兔IgG的免疫组化实验DAB显色。SP试剂盒是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，同亲和素一样，对生物素有极高的亲和力，亲和素是一个碱性蛋白质（PI=10），经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，对组织和细胞的非特异吸附很低，因此基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。
操作步骤（仅供参考）：
（以石蜡切片为例）
1. 切片常规脱蜡至水(三次二甲苯，三次乙醇)。
2. 3% H2O2室温处理5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
3.可选步聚：
a、热修复抗原，将切片浸入0.01M柠檬酸钠缓冲液（PH6.0），电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5-10分钟后，反复1-2次。冷却后PBS（pH7.2-7.6）洗涤1-2次。
b、酶消化，滴加消化液，37℃10分钟，PBS（pH7.2-7.4）洗涤2-3次。
c、跳过此步，直接进入下一步。
4. 滴加封闭液，室温20分钟。甩去多余液体，免洗。
5. 用稀释液将一抗按一定比例稀释（稀释后的一抗4℃可保存一周），也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗37℃ 孵育1小时左右或20℃ 2小时左右，也可4℃过夜。PBS（pH7.2-7.4）洗涤3次，每次2分钟。（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间。）
6．根据用量，用稀释液将Bio-羊抗兔IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1mL稀释液加入10μL Bio-羊抗兔IgG浓缩液混匀，此工作液4℃可保存一周)。滴加Bio-羊抗兔IgG工作液，20-37℃ 孵育30分钟。PBS（pH7.2-7.4）洗涤3次，每次2分钟。
7．根据使用量，用稀释液将链酶亲和素-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1mL稀释液加入10μL链酶亲和素-POD浓缩液混匀，此工作液4℃可保存一周)。滴加链酶亲和素-POD工作液，20-37℃，30分钟。PBS （pH7.2-7.4）洗涤4次，每次5分钟。
8．DAB显色：根据用量，用PBS（pH7.2-7.4）配制，按1mL PBS加入50μL 20×DAB显色液A，加入50μL 20×DAB显色液B 。充分混匀后滴加到切片上。室温显色，镜下控制反应时间，一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
9．苏木素轻度复染。脱水，透明，封片。显微镜观察。
对于细胞爬片，固定后，PBS漂洗两次，再用0.5% Triton X-100室温孵育20分钟，PBS漂洗两次，3% H2O2处理15分钟；PBS漂洗两次，接上述第4步。
对于冰冻切片，固定后，PBS漂洗两次，接上述第二步。
注意事项：
1. 如果染色背景过高，在SP反应之后，DAB显色之前，用加有0.01-0.02% TWEEN-20的PBST（pH7.2-7.4）洗涤切片4次，PBS洗2次，然后DAB显色。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
