MP1003-15T 超低分子量蛋白质Marker(3.3-20. 1kD)
超低分子量蛋白质Marker（3.3-20.1kD）使用说明书
货号:MP1003
规格:15T
产品简介:
本产品包含3种多肽和2种低分子量蛋白质组成，分子量范围为3. 3kD-20. 1kD。可以用来判断SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。本品为蛋白质和多肽混合物的冻干粉，每种蛋白含量约为15-22.5μg，配有一支1×上样缓冲液。
使用说明:
1、 开封后，溶于150 μL 1×上样缓冲液，于95℃水浴5分钟，可根据需要进行小量分装，每管10μL，-20℃贮存，每次取一管使用，避免反复冻融。
2、 使用前取分装后的小管室温融化后，95℃预热5分钟即可上样电泳，用考马斯亮蓝G-250染色后可见5条蛋白带(见下示意图) 。
凝胶的配置方法:
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分离胶 |
夹层胶 |
浓缩胶 |
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20%/4.5mL |
16.5%/4.5mL |
15.5%/4.5mL |
10%/2mL |
4%/2mL |
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49.5%T 3%C |
/ |
/ |
/ |
0.407mL |
0.160mL |
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49.5%T 6%C |
1.82mL |
1.50mL |
1.395mL |
/ |
/ |
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凝胶缓冲液 |
1.50mL |
1.50mL |
1.50mL |
0.667mL |
0.496mL |
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甘油 |
0.48mL |
0.48mL |
0.48mL |
/ |
/ |
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ddH2O |
0.70mL |
1.02mL |
1.125mL |
0.926mL |
1.344mL |
|
10%APS |
40µL |
40µL |
40µL |
20μL |
20μL |
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TEMED |
5µL |
5µL |
5µL |
3µL |
3µL |
凝胶制备及染色注意事项:
1、 先配制分离胶，聚合后再配制夹层胶，最后配制浓缩胶，3种胶的制胶体积比为4:1.5:1。电泳时，30v跑1-2小时后，待指示前沿到达分离胶上沿时，把电压调至100v，至电泳结束，整个电泳过程大约需要6-8小时。
2、 由于多肽所含的氨基酸数目较少，因此如该多肽含有过多的极性氨基酸(碱性或酸性)，则会影响其在SDS-PAGE图上的条带迁移率，即其表观分子量可能和多肽的氨基酸理论推算分子量有一定距离。
3、 由于SDS-PAGE的图谱上，蛋白质对数分子量和迁移率成正比直线关系的分子量范围为15,000-200,000，因此对于分子量小于10000的蛋白质或多肽的分子量，只能根据标准分子量进行估计，推断其是否落入预测的分子量范围。
4、 由于超低分子量多肽（3000及3000以下），极易从凝胶上浸出，因此染色及脱色时间不宜太长，脱色后凝胶也不宜在水中浸泡保存过久，否则条带会消失。
5、 电泳之后可将胶置于固定液中固定20分钟，再进行染色，能得到较好的蛋白条带；如时间不允许，也可不进行固定直接染色。如果使用配方7进行染色时效果不好或考虑其毒性，请选择本公司的考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液(货号:P1300)，该产品具有染色快，无毒，灵敏性高等特点，是常规染色液的替代品。
附:小分子蛋白质SDS-PAGE电泳试剂配制
1、 49.5% T 3 % C (配制夹层胶和浓缩胶)
2、49. 5 % T 6 % C (配制分离胶)
丙烯酰胺 46. 5g
甲叉双丙烯酰胺 3. 0g
用ddH20溶解后定容至100mL
3、凝胶缓冲液
Tris碱 182g
ddH20 300mL
用HCl调节pH值至8.45
用ddH20定容至 500mL
再加入SDS 1.5g
Tris碱 121. 1 g
ddH20 400mL
用HCl调pH值至8.9
用ddH20定容至 500mL
5、阴极缓冲液(上槽缓冲液)
Tricine 17.92g
SDS 1g
用ddH2O定容至1000mL
此溶液不用调节pH值
6、固定液
0.5% 戊二醛
30% 乙醇
用ddH20定容至100mL
7、染色液
50% 甲醇
10% 乙酸
0.2% 考马斯亮蓝G-250
用ddH20定容至500mL
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