产品内容：
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试剂盒组成 |
50T |
100T |
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浆蛋白抽提试剂 |
25mL |
50mL |
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核蛋白抽提试剂 |
5mL |
10mL |
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PMSF（100mM） |
300μL |
1mL |
产品简介：
本试剂盒提供了一种简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提核蛋白的方法。整个过程只需约60分钟就可以将核蛋白和浆蛋白从细胞中分离出来。得到的蛋白可以用于Western blot等实验。本试剂盒通过浆蛋白抽提试剂使细胞膨胀破裂，释放出胞浆蛋白，再通过离心得到细胞核。然后通过核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。本试剂盒可以抽提50/100个样品（每个样品约 2×106个Hela细胞或40mg组织）。
操作方法：
裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。
- 对于体外培养细胞：
- 根据用量取适当的浆蛋白抽提试剂和核蛋白抽提试剂加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。PMSF 需现用现加，若目标蛋白含有丰富的半胱氨酸，可以在两种蛋白抽提液中加入 DTT 至终浓度 0.5mM。
- 对于贴壁细胞，去除培养液，用PBS洗一遍，用细胞刮刀收集细胞，或用EDTA消化后吹打下细胞（最好不用胰酶硝化，以免胰酶消化目的蛋白）。500 g离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清留下沉淀备用。
- 对于悬浮细胞：用PBS洗一遍，500 g离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清，留下细胞沉淀备用。
- 每20μL细胞沉淀加入200μL浆蛋白抽提试剂（2×106个细胞沉淀的体积约20μL或40mg）。
- 用移液器吹打或高速涡旋15秒（可适当延长），必须使细胞沉淀完全分散开成单细胞悬液。细胞沉淀分散不完全会导致蛋白产量降低。
- 冰浴10分钟。
- 最高转速剧烈涡旋10秒，4℃ 12000～16000g 离心10分钟。
- 上清即为抽提得到的细胞浆蛋白，立即吸取上清至预冷的样品管中备用，进行后续的 PAGE、Western等实验，但蛋白浓度较低，可根据需要进行相应浓缩 (推荐使用: 货号EX6150胞浆蛋白提取试剂盒)。
- 沉淀即为细胞核，要完全吸尽残余的上清（避免细胞浆蛋白的污染），加入50-100μL核蛋白抽提试剂。
- 用移液器吹打或高速涡旋 15 秒（可适当延长）至沉淀完全分散，冰浴10分钟。
- 最高转速剧烈涡旋 10 秒，4℃12000～16000g 离心10分钟。
- 立即吸取上清至预冷的样品管中，此即为抽提得到的细胞核蛋白。可进行后续实验或-70℃冻存。
二、对于组织样品：
把组织称重后，尽可能切成非常细小的碎片，按每 50mg 组织加入 200μL-500μL PBS，用匀浆器 冰上匀浆制成细胞悬液，500 g 离心 2～3分钟收集细胞，吸尽上清，收集沉淀。加入 200μL 浆蛋白抽提试剂后接上述步骤5。
注意事项：
- 裂解得到的蛋白样品，由于含有较高浓度的去垢剂干扰，不能用Bradford法测定蛋白浓度，可以选用本公司生产的 BCA 蛋白定量试剂盒(货号 PN0120)测定蛋白浓度。
2．对于组织样品，本试剂盒适用于新鲜组织，对冻存组织抽提效果较差。
3．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
