试剂盒内容:
名称
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50T
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100T
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Storage
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裂解液
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50mL
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100mL
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2-8 ℃
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蛋白酶抑制剂(100×)
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0.5mL
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1mL
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-20℃
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PMSF(100×)
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0.5mL
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1mL
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-20℃
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产品简介:
本试剂盒用于大肠杆菌提取可溶性蛋白,试剂盒中的裂解液含有蛋白酶抑制剂,作用较为强烈,可快速获得总蛋白,可用于免疫印迹实验等基础研究实验,由于含有上述的酶抑制剂,不能用于研究蛋白激酶的研究。本品仅用于科研。
操作步骤:
1、细菌可溶性蛋白的提取
1) 在1mL的冷裂解液中各加入10μL的蛋白酶抑制剂和PMSF;混匀,放置在冰上备用;
2) 将菌体湿重称重,然后按照比例(1g:10mL)加入的新配置的裂解液,混匀,过程注意冰上操作;
3) 将混匀液移入超声仪中,超声;
超声条件:总时间45min,超声时间3s,间隔时间3s,过程为冰浴环境;
超声结束,4度离心,10000rpm/min 20min;
2、吸取上清至新的管中,进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。
(提取好的蛋白建议保存于-80℃,即用即取,避免反复冻融,避免长时间储存。)
注意事项:
1. 实验过程,所有试剂都要需要预冷或者即融,保证操作过程中的低温环境;
2. PSMF(有毒)现用现加,因为PMSF在水溶液中会快速降解;
3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。