TL662C 交联琼脂糖凝胶CL-2B

英文名称 : Sepharose CL-2B

储存条件 : 4-8℃

单位 : 瓶



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  • 商品介绍
  • 规格参数
  • 琼脂糖凝胶 CL-2B是在琼脂糖凝胶 2B的基础上通过交联使微球的刚性增强,理化性能提高,有利用于工业生产。该介质用于生物大分子的凝胶层析。

    外观

    本品为白色球状凝胶,无嗅、无味、无肉眼可见杂质。

    理化指标

     

     

     

    2%琼脂糖凝胶

    排阻极限

    70000~40×106 (球蛋白)

    形状

    球形

    粒径

    60~200μm

    最高流速

    15 cm/h*

    耐压

    0.025 MPa

    pH值稳定性

    3~13(长时间)2~14(短时间,在位清洗)

    化学稳定性

    可耐8mol/L尿素、6mol/L盐酸胍;可耐有机溶剂,如乙醇、DMFTHFDMSCH3Cl、丙酮、二甲基甲酰胺、二氯乙烷、吡啶、乙腈

    *检测条件: 层析柱10mm×300mm  *柱床高375px,25℃,流动相为0.1mol/LNaCl。

    包装

    产品以聚胺酯瓶密封包装,外贴标签,注明“品名、体积、颗粒大小、应用范围”等内容。

    贮存

    产品应密封贮存在4℃~25℃(保存溶液为20% 乙醇),通风、干燥、清洁的地方。不能冷冻。

    用过的柱子贮存在4℃(20% 乙醇)。

    注意事项

    本品应避免与氧化剂接触,避免长时间暴露在空气中

    运输

    运输中应避免日晒、雨淋、重压,严禁与有毒、有害物品混运。

    保质期

    5年。

    应用

    本产品具有很高的化学稳定性、高流速、较好的机械性能、可多次重复使用等特点,非特异性吸附低,回收率高,可用有机溶剂及1~2mol/L 的NaOH在位清洗,适用于工业规模生产,广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的凝胶色谱纯化。

    下面简要介绍介质的使用过程。

    8.1 装柱

    凝胶过滤介质的使用对装柱的要求较高,为了保证分离效果,一般通过柱子上加一个装柱器来使分离柱装满凝胶,或采用带有轴向加压装置的柱子。凝胶柱床一般高于1500px。装柱效果可用染料或丙酮-水溶液进行检验。


    以下过程为通用介质装填过程。若为带有轴向加压装置的柱子,可在柱床稳定后将柱床压紧,接好管路。

    (1)让所有的材料和试剂达到室温。配制缓冲液。凝胶层析上样、平衡和洗脱只用一种低盐浓度的缓冲液。

    (2)选择一根一定直径的柱子,长约30~1500px,根据柱子大小取所需量的凝胶(约为柱床体积的1.15倍),清洗掉20%乙醇,抽干,用缓冲液(按凝胶:缓冲液=3:1的比例)配成匀浆。

    (3)将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位(液面略高于滤膜),务必使底端无气泡。

    (4)用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意勿使产生气泡。打开柱子出液口,使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头。

    (5)打开蠕动泵,让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过,使柱床稳定。用缓冲液平衡柱子,到柱床稳定。

    (6)最好用一个装柱器辅助装柱。装完后柱床上端轻轻刮平,上好柱头。

    8.2 平衡

    让缓冲液以一定流速流过柱子,到流出液电导和pH不变。

    8.3 上样

    (1)样品用缓冲液配制,浑浊的样品要离心和过滤后上样。含盐量过大、浓度过小的样品要先做处理,再上样。

    (2)介质对样品组分的分离是按组分分子量大小进行的,分子量大的先流出来。

    (3)上样体积约为柱体积的1~2%,越小分离越好。

    8.4洗脱

    用缓冲液洗脱,洗脱中保持流速、缓冲液组成不变。

    8.5再生

    一般用缓冲液洗到平衡,可再次使用。

    8.6 注意

    在装柱、使用和保存柱子的时候,始终要避免柱子流干气泡进入。

    若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉,可用在位清洗(CIP)除去。

    8.7 在位清洗

    (1)对于以离子键结合上去的蛋白,可以用2M Nacl去除。

    (2)对沉淀蛋白、对以疏水性结合的蛋白或脂类,可用1M NaOH 去除。

    (3)对强疏水性结合的蛋白、脂类等,用4~10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗,但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加,否则容易产生气泡。

    清洗完毕后,用至少3倍缓冲液平衡柱子。

    8.8 注意

    在装柱、使用和保存柱子的时候,要避免柱子流干气泡进入。

    8.9 去热源

    用0.5M的氢氧化钠清洗柱子5~6小时或用0.1M的氢氧化钠24小时。或用以下方法步骤去除:

    (1)2倍柱体积的70%乙醇;

    (2)2倍柱体积50mM Tris-Hcl pH7.5;

    (3)1倍柱体积4M尿素;

    (4)3倍柱体积的Tris缓冲液+0.1M Nacl;

    以上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制。

    8.10 消毒

    用0.5~1M NaOH室温下洗8~10倍柱体积,初始缓冲液平衡柱子。

    特别注意:

    上样之前,样品必须去除色素,否则色素会被吸附到填料上,影响填料的正常使用。



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