TL574C 辛基-琼脂糖凝胶CL-4B

别名 : 辛基琼脂糖凝胶CL-4B

英文名称 : Octyl -Sepharose CL-4B

储存条件 : 4-28℃

外观(性状) : 颗粒

单位 : 瓶


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  • 商品介绍
  • 规格参数
  • 辛基-琼脂糖凝胶CL-4B说明:分离试剂,层析介质。颗粒大小:45-165µm;最高流速: 50cm/h;每毫升载量:40微摩尔正丁烷基n-Octyl;每毫升结合量:15-20mgHSA;纯化疏水性较弱的蛋白质或膜蛋白,因其经去污剂处理后仍有强疏水性。

    辛基-琼脂糖凝胶CL-4B产品简介
    辛基-琼脂糖凝胶CL-4B 是琼脂糖凝胶CL-4B的辛基衍生物,含有疏水性正辛基。具有较好的流速,在配基和骨架间的键很稳定,可反复在pH7.0、120°C热压消毒。纯化疏水性较弱的蛋白质或膜蛋白。
    产品参数
    产品名称:辛基-琼脂糖凝胶CL-4B(Octyl- Sepharose CL-4B)
    基质:4%琼脂糖凝胶
    配基:正丁烷基n-Octyl
    配基密度: 40μmol/mL
    颗粒大小:45-165μm
    最大流速:50cm/h
    每毫升结合量:15-20mgHSA
    操作温度:室温
    辛基-琼脂糖凝胶CL-4B使用方法
    1. 装柱
    (1) 将所有的试剂和填料达到室温.配制初始缓冲液(平衡液)和缓冲液。
    (2) 根据柱子大小取所需凝胶的量,清洗掉20%乙醇,抽干,用初始缓冲液(按凝胶:缓冲液=3:1比例)配成匀浆。
    (3) 将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液体(液面略高于滤膜),务必使底端无气泡。
    (4) 用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意不要使用气泡。打开柱子出液口,使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头。
    (5) 打开蠕动泵,让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过,使柱床稳定。用2-3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。
    2. 平衡
    让平衡缓冲液以一定流速流过柱子,到流出液电导和pH不变。平衡缓冲液一般是高盐浓度的缓冲液,如:0.02-0.05mol/L的PBS加1-2.5mol/L(NH4)2SO4等。
    3. 上样
    (6) 样品用平衡液配制,浑浊的样品要离心、过滤后上柱;
    (7) 一般情况是让目标产品结合在柱子上,用平衡洗液洗去杂质,再选择一种洗脱液洗下目标产品。
    (8) 介质对样品组分吸附的程度取决于样品的疏水性质、流动相的离子强度和温度。温度越大、盐浓度越高或样品组分疏水性越强,介质对组分吸附越牢。
    4. 洗脱
    疏水介质可用减小盐浓度进行洗脱。加表面活性剂或者有机溶剂可加强洗脱。最常用的洗脱液是低盐浓度缓冲液,如:0.02-0.05mol/L的PBS。
    5. 再生
    一般用低盐浓度的缓冲液洗,洗10倍以上柱体积,接着用结合蛋白的平衡液洗到平衡,可再次使用。若有失活的蛋白或者脂类物质在再生时洗不掉,可用在位清洗(CIP)除去。
    6. 在位清洗
    (1) 对于以离子键结合上去的蛋白,可以用2M  NaCl去除。
    (2) 对沉淀蛋白、以疏水作用结合的蛋白或者脂类物质,可用1M  NaOH去除。
    (3) 对强疏水性结合的蛋白、脂类等,可用4-10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗,但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加,否则容易产生气泡。
    清洗完毕后,用至少3倍柱体积缓冲液平衡柱子。
    7. 去热源
    用0.5M的氢氧化钠清洗柱子5-6小时或者用0.1M的氢氧化钠24小时。或用以下步骤去除:
    (1)2倍柱体积的70%的乙醇;
    (2) 2倍柱体积50Mm Tris-HcL Ph7.5
    (3)1倍柱体积4M尿素
    (4)3倍柱体积的Tris缓冲液+0.1M  NaCl;
    以上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制。
    8. 消毒
    用0.5-1.0 M NaOH 室温下洗8-10倍柱体积,初始缓冲液平衡柱子。
    辛基-琼脂糖凝胶CL-4B注意事项
    (1)密封贮存于4°C-28°C(保存溶液为20%乙醇+0.1 M醋酸钠),通风、干燥的地方,不能冷冻。用过的柱子贮存于4°C(20%乙醇)。
    (2)在装柱、使用和保存柱子的时候,要避免柱子流干,气泡进入。


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