本产品仅用于科研,不可用于其他。
荧光染料PI(碘化丙啶)是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂,常用于细胞凋亡检测,英文全称是Propidium Iodide。它是一种溴化乙啶的类似物,在嵌入双链DNA后释放红色荧光。尽管PI不能通过活细胞膜,但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。PI经常被用来与Calcein-AM或者FDA等荧光探针一起使用,能同时对活细胞和死细胞染色。PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535 nm和615 nm。
Propidium iodide已经证明了对神经元没有毒性作用,是目前最常见的膜完整性和细胞存活率的标志物,在固定前应用(预固定Propidium iodide染色法)。前固定化染色已被广泛应用于急性神经退化模型神经元细胞下降的定量评估,其形象化表现为被强烈标记为PI+-固核的退化神经元胞核。Propidium iodide不能穿过活细胞的细胞膜,通过流式细胞仪分析来测量凋亡细胞的百分比。流式细胞仪数据与电泳法和比色法的结果有很好的相关性。这种新的快速、简单、可复制的方法可用于评估异质性组织如骨髓、胸腺和淋巴结的细胞凋亡。
操作步骤(仅供参考):
1.储存液的配制:称取1mg PI粉末(M. Wt= 668.4),用1mL去离子水充分溶解后配置成1mg/mL(1.5 mM)的储存液。4℃避光保存,至少6个月稳定。
2.贴壁细胞复染步骤(荧光显微镜检测)
样本准备:根据自身样本选择合适的步骤固定细胞。PI染色一般在其它染色完成后再进行。PI复染要求细胞经透化处理。
RNase酶处理:若样本使用多聚甲醛,甲醛或者戊二醛固定,则需要进行RNase处理。若样本用甲醇/醋酸或者丙酮固定,通常不需要此步操作。
a,于2×SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡样本;
b,将本品置于含有100 μg/mL DNase-free RNase的2×SSC溶液中37℃孵育20min;
c,用2×SSC溶液清洗样本3次,每次1min。
复染:
a,于2×SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡样本;