本试剂盒适合于从各种粪便中提取微生物DNA。对粪便中各种细菌、真菌有很好裂解效果,最大限度的保留了微生物DNA的多态性。
使用本试剂盒提取的DNA产量大、完整性好,可直接用于各种常规操作,包括酶切、PCR 、文库构建、Southern 杂交等实验。
操作步骤: 使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
- 称取粪便样本 50-200mg,加入 400μL-800μL 溶液 SA,冰上放置 10min,12000g 离心 1min。
- 弃上清,沉淀中加入 400μL 溶液 SB,20μL 10mg/ml RNA酶A ,20μL 10mg/ml 蛋白酶 k,涡旋 30s,65℃水浴 30-60min,期间颠倒数次,12000g 离心 2min。
- 取上清于 1.5mL 离心管中,加入300-600μL 溶液 SC,12000g,离心1-2min,取上清。
- 吸取上清至 DNA 吸附柱中,室温静置 1-2min,12000g 离心0.5-1min(可重复一次)。
- 倒掉收集管中的废液,在吸附柱中加入漂洗液 500ul,12000 rpm 离心 1min。(重复一次)
- 倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管,12000 rpm 离心 0.5-1min。
- 拿出吸附柱在室温干燥数分钟( 因季节及气候等因素不等)。
- 将吸附柱放入一个新的离心管中,加入 50-100ul 洗脱液(65℃预热),12000 rpm 离心 1min。
- 将离心管中的液体重新加入到吸附柱中,12000 rpm 离心 1min。离心管中即为粪便微生物 DNA 溶液。
注意事项:
1、新鲜的粪便样本会得到更高的产率,不同样本在采样前应先查阅相应的最佳保存条件。
2、若溶液中出现浑浊可在37℃水浴中溶解片刻至清澈,不会影响结果。
3、在需要吸取上清液的步骤中应避免吸到沉淀,否则会堵塞吸附柱,并影响产物纯度。
4、洗脱缓冲液的体积最好不少于50uL,体积过小会影响回收效率;建议使用试剂盒附带的洗脱缓冲液,用水洗脱也会损失部分产物;DNA应保存在-20℃避免反复冻融,以防降解。
5、液体试剂避免接触皮肤,若意外接触应立即使用大量清水冲洗。