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详细说明

EX6010 高效RIPA裂解液(组织/细胞)

规格:
100mL /20mL
价格:
160 /70
货号:
EX6010
保存:
RIPA裂解液4℃保存,PMSF-20℃保存,
效期:
1年。
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产品说明
使用说明:...如发现RIPA有沉淀,请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。...根据使用量,取每1mL RIPA加入10uL PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM,混匀备用(PMSF现用现加)。...1、样品前处理:...a)对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。...b)对于悬浮细胞:离心收集细胞,按照6孔板每孔细胞量加入150-250uL裂解液的比例加入裂解液,用手指轻弹悬浮细胞以充分裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。...c)对于组织样品:把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量) 。用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。...2、后处理:...将裂解后的样品10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting和免疫沉淀等操作。...注意事项:...本试剂为强烈型裂解液,可以提取核蛋白,但在提取核蛋白的同时,也会将基因组一并释放出来,若细胞量多会造成细胞裂解液粘稠:此时可以直接加入蛋白上样缓冲液,煮沸再离心,离心后直接上样电泳;若想测定浓度,可加入少量 SDS(1%),煮沸后离心测浓度。本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含有去污剂,所以不适合使用Bradford 蛋白浓度测定试剂盒,请选择BCA法或者Lowry法检测蛋白浓度。...如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散粘稠状物,随后离心取上清用于后续实验。...
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